凍存袋方法的改進(jìn)

自1977年以來，CS50凍存袋報(bào)價(jià)，我們應(yīng)用四級(jí)梯度降溫凍存法對(duì)30余株哺乳動(dòng)物細(xì)胞及2株節(jié)肢動(dòng)物細(xì)胞共1000多支安瓶進(jìn)行了冷凍保存，效果較好，大部分細(xì)胞的活存率在70%以上。在此基礎(chǔ)上對(duì)8株抗登革4型(DEN一4)病毒雜交瘤細(xì)胞400多支安靚進(jìn)行了凍存。鑒于四級(jí)降溫凍存法步驟多，200-074-400凍存袋報(bào)價(jià)，需要經(jīng)過4℃冰箱和一20℃冰箱長(zhǎng)達(dá)7~8小時(shí)的梯度降溫，200-074-401凍存袋報(bào)價(jià)，較難適應(yīng)單工作中細(xì)胞凍存的需要。因此，自1982年以來我們摸索了影響細(xì)胞凍存的主要因素，確定了雜交瘤細(xì)胞凍存的適保護(hù)劑濃度(1.2〕，并研制成功細(xì)胞凍存簡(jiǎn)易裝置。

凍存袋技術(shù)

是將細(xì)胞放在低溫環(huán)境，減少細(xì)胞代謝，以便長(zhǎng)期儲(chǔ)存的一種技術(shù)。細(xì)胞凍存是細(xì)胞保存的主要方法之一，起到了細(xì)胞保種的作用。利用凍存技術(shù)將細(xì)胞置于-196℃液氮中低溫保存，可以使細(xì)胞暫時(shí)脫離生長(zhǎng)狀態(tài)而將其細(xì)胞特性保存起來，這樣在需要的時(shí)候再?gòu)?fù)蘇細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。而且適度地保存一定量的細(xì)胞，海淀區(qū)凍存袋報(bào)價(jià)，可以防止因正在培養(yǎng)的細(xì)胞被污染或其他意外事件而使細(xì)胞丟種，起到了細(xì)胞保種的作用。

凍存袋實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備

生長(zhǎng)良好之培養(yǎng)細(xì)胞、新鮮培養(yǎng)基、DMSO、無菌塑料冷凍保存管(Nalgene 5000-0020)、等速降溫機(jī)

冷凍方法理論準(zhǔn)備:

(1)傳統(tǒng)方法:冷存管置于4℃10分鐘--->-20℃30分鐘--->-8O℃16~18小時(shí)(或隔夜)--->液氮槽長(zhǎng)期儲(chǔ)存。-20℃不可超過1小時(shí)，以防止胞內(nèi)冰晶過大，造成細(xì)胞大量消失，亦可跳過此步驟直接放入-8O℃冰箱中。

(2）程序降溫:利用已設(shè)定程序的等速降溫機(jī)以-1~-3℃/分鐘之速度由室溫降至（-8o℃以下) -120℃，再放在液氮槽長(zhǎng)期儲(chǔ)存。適用于懸浮型細(xì)胞與hybridoma之保存。

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