凍存袋技術
是將細胞放在低溫環(huán)境，減少細胞代謝，以便長期儲存的一種技術。細胞凍存是細胞保存的主要方法之一，起到了細胞保種的作用。利用凍存技術將細胞置于-196℃液氮中低溫保存，可以使細胞暫時脫離生長狀態(tài)而將其細胞特性保存起來，這樣在需要的時候再復蘇細胞用于實驗。而且適度地保存一定量的細胞，200-074-401凍存袋代理，可以防止因正在培養(yǎng)的細胞被污染或其他意外事件而使細胞丟種，起到了細胞保種的作用。
凍存袋實驗前的準備
生長良好之培養(yǎng)細胞、新鮮培養(yǎng)基、DMSO、無菌塑料冷凍保存管(Nalgene 5000-0020)、等速降溫機
冷凍方法理論準備:
(1)傳統(tǒng)方法:冷存管置于4℃10分鐘--->-20℃30分鐘--->-8O℃16~18小時(或隔夜)--->液氮槽長期儲存。-20℃不可超過1小時，以防止胞內冰晶過大，造成細胞大量消失，亦可跳過此步驟直接放入-8O℃冰箱中。
(2）程序降溫:利用已設定程序的等速降溫機以-1~-3℃/分鐘之速度由室溫降至（-8o℃以下) -120℃，再放在液氮槽長期儲存。適用于懸浮型細胞與hybridoma之保存。
細胞凍存步驟
1.用移液器吸走原培養(yǎng)基，加入適量PBS洗1-2遍;
2.加入適量胰酶，CS50凍存袋代理，置于培養(yǎng)箱中消化;
3.待消化到位后加入適量血漿或完全培養(yǎng)基終止消化，800-1000rpm離心3-5min;
4.配制凍存液，CS250凍存袋代理，待細胞離心后去上清，加入凍存液重懸，調整細胞濃度為3×106~1×107 cells/mL，凍存袋代理，轉移到凍存管中;
5.將凍存管放入程序降溫盒中，-80度過夜，然后轉移到液氮中保存。
6.凍存細胞后應取出一管復蘇，檢測細胞的存活率。理論上細胞可在液氮內長期保存，
為穩(wěn)妥起見可在細胞凍存半年后復蘇培養(yǎng)，觀察細胞生長情況，再繼續(xù)凍存
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