細胞凍存復(fù)蘇方法

1.  細胞實驗室進行常規(guī)消毒，紫外照射40min以上。

2.  培養(yǎng)液（DMEM）、0.25％胰蛋白酶（Trypsin）恒溫水浴箱37°C預(yù)熱20min，備用。

3.  二亞砜（DMSO)在40°C冰箱中冷藏30min，備用。

4.  從液氮保存罐中取出凍存管，立即放入400°C水浴中，CS250凍存袋批發(fā)，快速搖晃，直至凍存液完全融化。

5.  將細胞懸液移入15ml離心管，緩慢加入4ml培養(yǎng)液，CS250凍存袋，離心（1000r/min，5min）。

6.  用培養(yǎng)液懸液混懸沉淀細胞，調(diào)整細胞濃度，方培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

7.  記錄復(fù)蘇日期。

凍存袋的作用

適度地保存一定量的細胞，可以防止因正在培養(yǎng)的細胞被污染或其他意外事件而使細胞丟種，起到了細胞保種的作用。除此之外，還可以利用細胞凍存的形式來購買、寄贈、交換和運送某些細胞。 細胞凍存時向培養(yǎng)基中加入保護劑--終濃度5%．15%的甘油或二亞砜(DMSO)，可使溶液冰點降低，加之在緩慢***條件下，細胞內(nèi)水分透出，減少了冰晶形成，從而避免細胞損傷。

凍存袋操作流程

（1）冰凍當天進入***局域網(wǎng)，查詢當日***間冰凍安排表，大致了解當日的冰凍情況，并提前通知當日負責冰凍送片的初檢醫(yī)生，避免遺漏。

（2）取材前確定標本冰凍報告已發(fā)出，核對標本病理號、住院號，準確記錄其病理號、住院號、姓名（至少有其中2項）于凍存***登記本上。

（3）在新鮮標本取材臺上取材，并使用取材器具，同一天使用頻繁時，每取完一例標本器具應(yīng)清洗后浸泡于消毒液中，以防止其他標本污染。

（4）在不影響外檢取材的前提下，CS250凍存袋多少錢，充分取材。良變?nèi)∽銐蛄坎≡?，CS250凍存袋哪家好，病變?nèi)∽銐蛄坎≡罴?**旁正常***（***旁正常***遠離病灶應(yīng)盡量>2cm）。

（5）將所取標本切割成直徑1～2mm的***塊，不同標本及同一標本不同部位裝入相應(yīng)凍存管中，做好標記（注意順序，切取標本、夾放凍存管都應(yīng)遵循“先正常-后”的順序，避免***污染）。

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