凍存袋，可千萬別這么用哈！

1.不要使用金屬管夾

2.不要離心

3.不要在凍存袋上直接寫字標識凍存細胞的信息

4.不要在凍存袋表面粘帖標簽不推薦使用同一凍存袋多次凍融細胞

5.DMSO稀釋以后才能放進凍存袋，CS250凍存袋多少錢，DMSO濃度不要超過10%

6.復蘇細胞時建議把凍存袋放在一個保護袋中進行融化

7.不要超過凍存袋推薦的工作體積

凍存袋實驗前的準備

生長良好之培養(yǎng)細胞、新鮮培養(yǎng)基、DMSO、無菌塑料冷凍保存管(Nalgene 5000-0020)、等速降溫機

冷凍方法理論準備:

(1)傳統(tǒng)方法:冷存管置于4℃10分鐘--->-20℃30分鐘--->-8O℃16~18小時(或隔夜)--->液氮槽長期儲存。-20℃不可超過1小時，以防止胞內(nèi)冰晶過大，造成細胞大量消失，凍存袋報價，亦可跳過此步驟直接放入-8O℃冰箱中。

(2）程序降溫:利用已設定程序的等速降溫機以-1~-3℃/分鐘之速度由室溫降至（-8o℃以下) -120℃，再放在液氮槽長期儲存。適用于懸浮型細胞與hybridoma之保存。

凍存袋方法的改進

自1977年以來，我們應用四級梯度降溫凍存法對30余株哺乳動物細胞及2株節(jié)肢動物細胞共1000多支安瓶進行了冷凍保存，效果較好，凍存袋代理，大部分細胞的活存率在70%以上。在此基礎上對8株抗登革4型(DEN一4)病毒雜交瘤細胞400多支安靚進行了凍存。鑒于四級降溫凍存法步驟多，需要經(jīng)過4℃冰箱和一20℃冰箱長達7~8小時的梯度降溫，凍存袋，較難適應單工作中細胞凍存的需要。因此，自1982年以來我們摸索了影響細胞凍存的主要因素，確定了雜交瘤細胞凍存的適保護劑濃度(1.2〕，并研制成功細胞凍存簡易裝置。