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DEAE-葡聚糖轉(zhuǎn)染法

DEAE-葡聚糖轉(zhuǎn)染法的原理時(shí)帶正電的DEAE-葡聚糖與核酸帶負(fù)電的磷酸骨架相互作用形成復(fù)合物通過細(xì)胞內(nèi)吞噬作用而使DNA轉(zhuǎn)導(dǎo)進(jìn)入細(xì)胞核。此法只適合瞬時(shí)轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)，轉(zhuǎn)染效率與DEAE-葡聚糖的濃度以及細(xì)胞與DNA/EDAE-葡聚糖混合液接觸時(shí)間的長短有關(guān)，可采用較高濃度的DEAE-葡聚糖（1g/L）作用較短時(shí)間（0.5-1.5h），也可用較低濃度（250mg/L）的DEAE-葡聚糖坐擁較長時(shí)間（8h）。

1. 將上述復(fù)合物直接加入到細(xì)胞培養(yǎng)基中，輕搖細(xì)胞板或用加樣器吸打混勻。備注：轉(zhuǎn)染復(fù)合物可直接加入含血0清的細(xì)胞培養(yǎng)基中進(jìn)行轉(zhuǎn)染。在極0少情況下會出現(xiàn)貼壁細(xì)胞脫落現(xiàn)象，可先從待轉(zhuǎn)染細(xì)胞孔中吸取 500μl 培養(yǎng)基與轉(zhuǎn)染復(fù)合物預(yù)混后再加入細(xì)胞中。若在細(xì)胞瓶中進(jìn)行轉(zhuǎn)染，直接加入到無細(xì)胞貼壁的對面或側(cè)面并搖勻即可。

2. 將細(xì)胞板移至 37oC/5% CO2 孵箱中進(jìn)行培養(yǎng)。備注：無需在轉(zhuǎn)染后 4~6 小時(shí)補(bǔ)加血0清或更換培養(yǎng)基。

3. 24~72 小時(shí)后根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要進(jìn)行瞬時(shí)表達(dá)分析或穩(wěn)定細(xì)胞系加壓篩選。

已有眾多的文獻(xiàn)報(bào)道，脂質(zhì)體本身會參與細(xì)胞生理活動，脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染***，引起***表達(dá)的上調(diào)或下調(diào)。如參與PKC（蛋白激酶C）通路調(diào)節(jié)(Biochemistry.1992 Sep 22;31(37): 9025-30)；如***ATP酶的活性(Biochim Biophys Acta.2008 Apr;1777(4):362-8)；如與線粒體膜發(fā)生作用(J Biol Chem. 1989 Jan 25;264(3):1508-15)；轉(zhuǎn)染siRNA造成脫靶效應(yīng)等等。細(xì)胞毒性的大小往往意味著對細(xì)胞生理活動影響的大小，脂質(zhì)體這些作用是造成細(xì)胞毒性的根本原因。這會對相關(guān)研究數(shù)據(jù)產(chǎn)生嚴(yán)重的干擾，甚至影響研究的結(jié)論。這已引起了許多研究者的注意。




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