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博奧龍公司主要產(chǎn)品有抗0體制備***產(chǎn)品、病毒包裝相關(guān)產(chǎn)品、2萬多種科研用抗原抗0體、1200多種二抗,涵蓋20多個物種和HRP、Biotin、FITC、AU、PE、Dylight、Alexa Fluor、Cy3、Cy5、 AMCA、TRITC、Texa Red等標記二抗;品類齊全的內(nèi)參標簽抗0體;另有WB、IHC、ELISA、細胞培養(yǎng)相關(guān)***及諸多特色產(chǎn)品和特色技術(shù)服務(wù)。
抗0體亞型鑒定原理:
抗0體亞型鑒定的原理是利用雙抗0體夾心法鑒定小鼠淋巴細胞雜交瘤培養(yǎng)上清中單克0隆抗0體或特異親和純化的單克0隆抗0體的類和亞類(可區(qū)分出 IgG1﹨IgG2a﹨IgG2b﹨IgG3﹨IgM﹨IgA)。采用小鼠抗0體共有位點的二抗包被微孔板,與加入的培養(yǎng)上清中的小鼠抗0體結(jié)合,再加入HRP 標記的抗小鼠各類、亞類的抗0體來分別反應(yīng),***后用 TMB 底物系統(tǒng)顯色并用稀***終止,再通過酶0標儀檢測吸光度來判斷被測單克0隆抗0體的類或亞類。
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什么是單克0隆抗0體?
單克0隆抗0體(MAb),是針專一的抗原決定簇產(chǎn)生的抗0體,單克0隆技術(shù)又名雜交瘤技術(shù)起源于1975年,由G.K?hler和Milstein創(chuàng)立。主要原理是利用產(chǎn)生抗0體的B細胞與腫0瘤細胞雜交融合成雜交瘤細胞,生產(chǎn)抗0體。
單克0隆抗0體制備的原理是什么?
要制備單克0隆抗0體需先獲得能合成專一性抗0體的單克0隆B淋巴細胞,但這種B淋巴細胞不能在體外生長。而實驗發(fā)現(xiàn)骨0髓瘤細胞可在體外生長繁殖,應(yīng)用細胞雜交技術(shù)使骨0髓瘤細胞與免0疫的淋巴細胞二者合二為一,得到雜0種的骨0髓瘤細胞。這種雜0種細胞繼承兩種親代細胞的特性,它既具有B淋巴細胞合成專一抗0體的特性,也有骨0髓瘤細胞能在體外培養(yǎng)增殖永存的特性,用這種來源于單個融合細胞培養(yǎng)增殖的細胞群,可制備抗一種抗原決定簇的特異單克0隆抗0體。
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實驗步驟:
1、棄去板內(nèi)液體,洗板5遍后在不掉纖維的吸水材料上拍干或機洗5遍。再在每個標本的6孔中分別加入6種酶標二抗各100μl,通用陽性、陰性對照的各孔也一樣。在加樣圖上或酶標板上做好標記。貼上封板膜37℃溫育30分鐘。
2 、吸棄板內(nèi)液體,洗板5遍后在不掉纖維的吸水材料上拍干或機洗5遍。每孔分別加入顯色劑 A 和顯色劑 B 各50μl,換一張新的封板膜貼板避光37℃顯色20分鐘。
3 、ELISA***盒特異性好一般肉眼即可觀察出結(jié)果,看顯色藍的那個孔所對應(yīng)的酶標二抗就知道此標本的 Ig 類或亞類。更可將反應(yīng)終止液(每孔50μl)終止反應(yīng)后用酶0標儀450nm 測長,630nm 參考波長雙波長測定結(jié)果,參看高值孔所對應(yīng)的酶標二抗就知道此標本的 Ig 類或亞類(陽性對照 OD 一般不小于0.8,陰性對照一般不高于0.15,陽性判定標準:樣品 OD 大于陰性 OD+0.15,陰性 OD 低于0.05按0.05算)。
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