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實(shí)驗(yàn)步驟:
1、棄去板內(nèi)液體,洗板5遍后在不掉纖維的吸水材料上拍干或機(jī)洗5遍。再在每個(gè)標(biāo)本的6孔中分別加入6種酶標(biāo)二抗各100μl,通用陽(yáng)性、陰性對(duì)照的各孔也一樣。在加樣圖上或酶標(biāo)板上做好標(biāo)記。貼上封板膜37℃溫育30分鐘。
2 、吸棄板內(nèi)液體,洗板5遍后在不掉纖維的吸水材料上拍干或機(jī)洗5遍。每孔分別加入顯色劑 A 和顯色劑 B 各50μl,換一張新的封板膜貼板避光37℃顯色20分鐘。
3 、ELISA***盒特異性好一般肉眼即可觀察出結(jié)果,看顯色藍(lán)的那個(gè)孔所對(duì)應(yīng)的酶標(biāo)二抗就知道此標(biāo)本的 Ig 類或亞類。更可將反應(yīng)終止液(每孔50μl)終止反應(yīng)后用酶0標(biāo)儀450nm 測(cè)長(zhǎng),630nm 參考波長(zhǎng)雙波長(zhǎng)測(cè)定結(jié)果,參看高值孔所對(duì)應(yīng)的酶標(biāo)二抗就知道此標(biāo)本的 Ig 類或亞類(陽(yáng)性對(duì)照 OD 一般不小于0.8,陰性對(duì)照一般不高于0.15,陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn):樣品 OD 大于陰性 OD+0.15,陰性 OD 低于0.05按0.05算)。
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博奧龍公司主要產(chǎn)品有抗0體制備***產(chǎn)品、病毒包裝相關(guān)產(chǎn)品、2萬(wàn)多種科研用抗原抗0體、1200多種二抗,涵蓋20多個(gè)物種和HRP、Biotin、FITC、AU、PE、Dylight、Alexa Fluor、Cy3、Cy5、 AMCA、TRITC、Texa Red等標(biāo)記二抗;品類齊全的內(nèi)參標(biāo)簽抗0體;另有WB、IHC、ELISA、細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)***及諸多特色產(chǎn)品和特色技術(shù)服務(wù)。
單克0隆抗0體的大量制備
單克0隆抗0體的大量制備重要采用動(dòng)物體內(nèi)誘生法和體外培養(yǎng)法。
1、體內(nèi)誘生法 取Balb/c小鼠。
首先腹腔注0射0.5ml液體石臘或降植烷進(jìn)行預(yù)處理。1-2周后,腹腔內(nèi)接種雜交瘤細(xì)胞。雜交瘤細(xì)胞在小鼠腹腔內(nèi)增殖,并產(chǎn)生和分泌單克0隆抗0體。約1-2周,可見(jiàn)小鼠腹部膨大。用注0射器抽取腹0水,即可獲得大量單克0隆抗0體。
2、體外培養(yǎng)法
將雜交瘤細(xì)胞置于培養(yǎng)瓶中進(jìn)行培養(yǎng)。在培養(yǎng)過(guò)程中,雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生并分泌單克0隆抗0體,收集培養(yǎng)上清液,離心去除細(xì)胞及其碎片,即可獲得所需要的單克0隆抗0體。但這種方法產(chǎn)生的抗0體量有限。近年來(lái),各種新型培養(yǎng)技術(shù)和裝置不斷出現(xiàn),大大提高了抗0體的生產(chǎn)量。
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如果機(jī)體內(nèi)B細(xì)胞缺失或減少,***因缺乏抗0體往往反復(fù)出現(xiàn)微生物所致的,常引起膿皮病、化膿性、、氣管炎和等;患的人,腺病毒滴度檢測(cè),IgG、IgA都有一定的;患慢性淋巴細(xì)胞性的人則屯IgA和IgM降低。
B細(xì)胞和T細(xì)胞一樣,在未接觸抗原之前,不能產(chǎn)生效應(yīng)。必須受到抗原刺激,并在輔助T細(xì)胞和巨噬細(xì)胞協(xié)助下,經(jīng)過(guò)抗原與抗原受體相互識(shí)別,D細(xì)胞進(jìn)入狀態(tài),通過(guò)增殖轉(zhuǎn)變?yōu)橛行?yīng)的漿細(xì)胞后,才能產(chǎn)生抗0體。
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