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博奧龍公司主要產(chǎn)品有抗0體制備***產(chǎn)品、病毒包裝相關(guān)產(chǎn)品、2萬多種科研用抗原抗0體、1200多種二抗,涵蓋20多個物種和HRP、Biotin、FITC、AU、PE、Dylight、Alexa Fluor、Cy3、Cy5、 AMCA、TRITC、Texa Red等標記二抗;品類齊全的內(nèi)參標簽抗0體;另有WB、IHC、ELISA、細胞培養(yǎng)相關(guān)***及諸多特色產(chǎn)品和特色技術(shù)服務(wù)。
典型的G蛋白偶聯(lián)受體傳遞信號的基本原理是:特異性的配體結(jié)合到相應(yīng)的7次跨膜的G蛋白偶聯(lián)受體(GPCR)上,引起GPCR構(gòu)象的變化;構(gòu)象變化之后的GPCR能夠結(jié)合相應(yīng)的GDP結(jié)合狀態(tài)的三聚體G蛋白,并誘導三聚體的Ga 亞基構(gòu)象發(fā)生變化,釋放結(jié)合的GDP。處于空置狀態(tài)的Ga 亞基迅速與周圍環(huán)境中的GTP結(jié)合。結(jié)合了GTP的Ga 亞基立即與GPCR和Gbg亞基復合物分離(如圖)。自由的Ga 亞基和Gbg 亞基分別與下游的效應(yīng)蛋白結(jié)合,通過調(diào)控效應(yīng)蛋白的活性來實現(xiàn)信號的轉(zhuǎn)導。Ga 亞基在同效應(yīng)蛋白結(jié)合的同時或者之后,水解結(jié)合的GTP成為GDP,于是Ga 亞基在自身的調(diào)節(jié)下關(guān)閉功能,回到非活性的GDP結(jié)合狀態(tài),并與Gbg 亞基形成三聚體,等待下一次信號轉(zhuǎn)導。
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注:
抗原注0射以前需要收集一些正常血0清,慢病毒,已備檢測抗0體時作為陰性對照。待兔子在新環(huán)境中穩(wěn)定,大概需要四天左右時間,可以進行耳動脈取血。取血量約5ml足矣。
免0疫用的抗原必須純化,否則影響抗0體的質(zhì)量??乖?jīng)FCA或FIA充分乳化后才能注0射。將抗原液與佐劑等比例混合后,置于混合器上使之劇烈振蕩使抗原充分乳化,乳化過程比較費時、費力,但若乳化不充分,會影響免0疫的效果,振蕩后,1000rpm離心一分鐘,如水相和油相不分層即可注0射。首0次免0疫用FCA,以后都用FIA。
免0疫方法可采用背部多點注0射法。即于家兔脊柱兩旁選4-6點皮下0注0射,每點注0.1ml,間隔2周后再于上述部位選不同點注0射(不要選擇臨近位點,否則***愈合不好)。每次免0疫的抗原量約100μg。免0疫次數(shù)在四五次即可,抗原用量大可以減少次數(shù)。
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水佐劑是一種用于制備小鼠單克0隆抗0體和多克0隆抗0體的免0疫佐劑,與常規(guī)使用的弗氏佐劑相比,具有免0疫針次少、抗原用量低、抗0體產(chǎn)生快、抗0體滴度高、抗0體親合力高、不***抗原天然構(gòu)象和使用方便等優(yōu)點。
水佐劑使用重要提示
1、水佐劑只需兩針免0疫,無論是用于單克0隆還是多克0隆抗0體制備,與弗氏佐劑相比可至少減少兩針次免0疫。
2、水佐劑通過減少免0疫針次和降低每針次抗原用量,從而可大大節(jié)省總抗原用量。推薦使用的抗原用量為
(1)免0疫原性較弱的亞單位蛋白每針次1~50μg(通常為10~20μg);
(2)免0疫原性較強的滅活全病毒和病毒樣顆粒每針次0.1~10μg(通常為1~2μg)。
3、水佐劑抗0體產(chǎn)生快,抗0體滴度高,抗0體親合力高,無論是用于單克0隆還是多克0隆抗0體制備,只需要在三周內(nèi)進行兩針免0疫,通常在第五周即可獲得ELISA滴度高1:10000~1:10000000的高親合力抗0體水平。
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