【摘要】 目的建立一種快速制備甲胎蛋白單克0隆抗0體(AFP—McAb)雜交瘤細(xì)胞系的方法。 方法 以常規(guī)和改良兩

種方式同時(shí)免0疫8～12周Balb／c小鼠，取小鼠脾細(xì)胞與骨0髓瘤細(xì)胞SP2／0融合并行次黃piao呤、氨基蝶呤與胸苷選擇性培養(yǎng)。

用間接酶鏈免0疫吸附試驗(yàn)法(EI。ISA)篩選陽(yáng)性克0隆株，并建立細(xì)胞系。 結(jié)果 在較短時(shí)間內(nèi)，改良法能獲得高0效價(jià)的免0疫

抗0體，與常規(guī)免0疫法相比有極顯著差異(P<0．001)，同時(shí)改良法的細(xì)胞融合率和抗0體陽(yáng)性率也顯著高于常規(guī)免0疫法

(P<o．001)。篩選獲得的高0效分泌抗人AFP—McAb的陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞珠進(jìn)行了初步鑒定。 結(jié)論 新的改良方法優(yōu)化了

常規(guī)的McAb制備中動(dòng)物免0疫程序，并能成功篩選出AFP—McAb雜交瘤細(xì)胞系。

抗果蠅 MRJ 蛋白單克0隆抗0體的制備和鑒定

摘要: 制備抗 果 蠅 MRJ 蛋白單克0隆抗0體可用于研究果蠅 mrj 的 生 物 學(xué) 功 能，轉(zhuǎn)染***盒，使 用 IPTG 誘 導(dǎo) 重 組 質(zhì) 粒pET28a-mrj 在大腸桿0菌 Rosetta 中表達(dá)，重組蛋白經(jīng)過(guò) Ni-IDA 凝膠柱親和純化后免0疫 BALB/c 小鼠。然后取免0疫好的小鼠的脾0臟細(xì)胞與小鼠骨0髓瘤細(xì)胞 SP2 /0 融合，經(jīng)克0隆和篩選獲得了能分泌抗果蠅 MRJ 蛋白單克0隆抗0體的雜交瘤細(xì)胞株。腹0水制備后獲得單克0隆抗0體，通過(guò) ELISA 和 Western Blot 對(duì)所獲得的抗0體進(jìn)行鑒定，結(jié)果表明所制備單克0隆抗0體能夠特異性結(jié)合于原核及真核細(xì)胞表達(dá)的 MRJ 蛋白，可用于研究 mrj ***的生物學(xué)功能。

關(guān)鍵詞: mrj; 細(xì)胞融合; 單克0隆抗0體

細(xì)胞融合

取已免0疫小鼠的脾0臟用不完全培養(yǎng)基制成細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)。收集選擇生長(zhǎng)狀態(tài)良好的 SP2 /0 骨0髓瘤細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)。將 SP2 /0 骨0髓瘤細(xì)胞與免0疫小鼠的脾細(xì)胞以 1∶ 10 在 50% 的 PEG1500 作用下融合［8］。加 HAT 選擇培養(yǎng)基重懸混勻后滴入到鋪有飼養(yǎng)層細(xì)胞的 3 塊 96 孔細(xì)胞培養(yǎng)板。放入37 ℃ ，含 5% 的 CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

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