蛋白質(zhì)定量組學(xué)服務(wù)

細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)組豐度的動(dòng)態(tài)變化對(duì)不同生命過(guò)程有重要影響。例如在許多***的發(fā)生和發(fā)展進(jìn)程中，常常伴隨著某些蛋白質(zhì)的表達(dá)異常。目前定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)主要分為標(biāo)記(label)策略和非標(biāo)記的(label free)定量策略，其中標(biāo)記策略又分為體內(nèi)標(biāo)記(如 SILAC、15N 標(biāo)記)，pcr引物設(shè)計(jì)，以及體外標(biāo)記(如 iTRAQ、TMT 標(biāo)記) 。

傳統(tǒng)的基于2D雙向凝膠電泳分離的蛋白質(zhì)組通常可以鑒定出約1000種蛋白，對(duì)全蛋白質(zhì)組的覆蓋僅在5~10%左右，不能滿足高通量定量蛋白質(zhì)表達(dá)譜分析的要求。我們結(jié)合樣品制備與高分辨率、高靈敏度的液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，可在細(xì)胞與***類樣品中鑒定直至多于10000個(gè)蛋白，對(duì)全蛋白質(zhì)組的覆蓋>60%。結(jié)合生物信息學(xué)分析，為您構(gòu)建高通量蛋白質(zhì)定量表達(dá)譜。

二、使用說(shuō)明

1、裝載探針

對(duì)于刺激時(shí)間較短（通常為2小時(shí)以內(nèi)）的細(xì)胞，先裝載探針，后用活性氧陽(yáng)性對(duì)照及自己感興趣的刺激細(xì)胞。對(duì)于細(xì)胞刺激

時(shí)間較長(zhǎng)（通常為6小時(shí)以上）的細(xì)胞，先用活性氧陽(yáng)性對(duì)照及自己感興趣的刺激細(xì)胞，后裝載探針。

原位裝載探針：本方法僅適用于貼壁培養(yǎng)細(xì)胞。按照1：1000用無(wú)培養(yǎng)液稀釋DCFH-DA，使終濃度為10微摩爾/升。去除細(xì)胞培養(yǎng)液，加入適當(dāng)體積稀釋好的DCFH-DA。加入的體積以能充分蓋住細(xì)胞為宜，通常對(duì)于六孔板的一個(gè)孔加入稀釋好的DCFH-DA的體積為1毫升。37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)孵育20分鐘。用無(wú)細(xì)胞培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞三次，以充分去除未進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的DCFH-DA。

單細(xì)胞RNA測(cè)序

單細(xì)胞RNA測(cè)序也稱scRNA-Seq。通常而言，一般的***細(xì)胞RNA-seq實(shí)驗(yàn)會(huì)產(chǎn)生1000萬(wàn)個(gè)讀數(shù)，dna檢測(cè)，如果一個(gè)***的頻率超過(guò)50RPKM，pcr，即每百萬(wàn)讀數(shù)中每千個(gè)堿基中超過(guò)50個(gè)，這一***即被認(rèn)為有表達(dá)。泊松分布下，1kb長(zhǎng)的***有超過(guò)500個(gè)讀數(shù)和4%的小變異系數(shù)，pcr實(shí)驗(yàn)室，即CV值；哺乳動(dòng)物細(xì)胞通產(chǎn)含有200，000個(gè)mRNA，因此至少要用50個(gè)單細(xì)胞一起才能到達(dá)小CV值；考慮到逆轉(zhuǎn)錄的效率和環(huán)境干擾等因素，為得到準(zhǔn)確的表達(dá)和細(xì)胞種類的識(shí)別，需要使用的細(xì)胞數(shù)量實(shí)際要更多。