微陣列芯片應(yīng)用流程

1）制備靶點(diǎn)

從生物標(biāo)本中提取核苷酸并進(jìn)行標(biāo)記；

（2）雜交

讓靶點(diǎn)與芯片上的cDNA或寡核苷酸序列進(jìn)行孵育；

（3）獲取數(shù)據(jù)

掃描與探針雜交的靶點(diǎn)表現(xiàn)出來的信號強(qiáng)度

（4）數(shù)據(jù)分析

從大量數(shù)據(jù)中得出具有生物學(xué)意義的結(jié)論

微陣列芯片技術(shù)通過測定能夠與探針雜交的mRNA的數(shù)量，反映表達(dá)此mRNA的***的轉(zhuǎn)錄情況，微陣列基片的價格，芯片的構(gòu)建首先要根據(jù)研究的需要選擇***及相應(yīng)的探針，其次是從標(biāo)本中提取mRNA，并制備出靶點(diǎn)，然后將靶點(diǎn)加入芯片，進(jìn)行孵育雜交、沖洗掉沒有雜交的樣品以及掃描等操作，廣東微陣列基片，得到原始數(shù)據(jù)，再將這些數(shù)據(jù)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化和統(tǒng)計分析后得到結(jié)論，構(gòu)造適當(dāng)?shù)奈㈥嚵行酒情_展后續(xù)研究的基礎(chǔ)。

2.APES(3-氨丙基-乙氧基)

APES必須現(xiàn)用現(xiàn)配。用此方法黏合的玻片應(yīng)垂直烤片而不能水平烤片，微陣列基片廠家，否則，***片中易出現(xiàn)氣泡。 APES的使用方法:用50倍稀釋(APESl份、49份混合)，將洗凈的玻片放人稀釋好的APES中，停留20~30秒，取出稍停，再人純或蒸餾水中涮去未結(jié)合的APES。置通風(fēng)櫥中晾干即可。注意用APES防脫片處理的載玻片撈片時***應(yīng)一步到位.并盡量減少氣泡存在，以免影響染色結(jié)果。注意不要將APES與其他防脫混合使用。

使用廣泛的氨基和羧基偶聯(lián)劑就要數(shù)EDC和NHS（Sulfo-NHS）了。大多數(shù)情況下，微陣列基片是什么，同時使用EDC/NHS的交聯(lián)于只使用EDC的，NHS的使用能夠極大增強(qiáng)偶聯(lián)效率。但也有個例，比如2012年的一篇工作（Diagnostics (Basel). 2012 Aug 27;2(3):23-33.），他們在APETS修飾的金芯片和96孔板表面組裝一抗，發(fā)現(xiàn)單獨(dú)使用EDC比同時使用EDC/NHS和EDC/Sulfo-NHS都。

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