STR檢測(cè)
短串聯(lián)重復(fù)(Short tandem repeats，***檢測(cè)怎么做， STR)，又稱微wei星DNA(Microsatellite DNA)或簡(jiǎn)單重復(fù)序列(Simple repeat sequence， SRS或SSR)，是廣泛存在于原核生物和真核生物***組中的核苷酸重復(fù)序列。有絲分裂過程中DNA鏈之間的錯(cuò)配引起的fu制滑動(dòng)被認(rèn)為是導(dǎo)致STR產(chǎn)生的較為常見原因，并且依據(jù)不同fu制單元大小的不同以及不同物種之間，fu制滑動(dòng)發(fā)生的概率也不相同。
STR是以序列 (core repeat units) 首尾相連多次重復(fù)形成。每個(gè)STR的序列結(jié)構(gòu)相同，長(zhǎng)度為2-6bp，但其重復(fù)單位數(shù)目和重復(fù)區(qū)域的長(zhǎng)度不同，pcr檢測(cè)，因此STR在不同種族、不同人群之間的分布具有差異性，構(gòu)成了STR遺傳多態(tài)性。不同個(gè)體之間在一個(gè)同源STR位點(diǎn)的重復(fù)次數(shù)也不同，因而同***識(shí)別一樣，STR位點(diǎn)分析也可對(duì)個(gè)體進(jìn)行身份識(shí)別。通過識(shí)別個(gè)體***組在特***點(diǎn)的特定序列重復(fù)，即可創(chuàng)建其***檔案?；诖?，常州pcr，STR分析法已經(jīng)成為一種重要的鑒定分析方法，應(yīng)用于法***、qin子鑒定及細(xì)胞鑒定等領(lǐng)域。
RIP
技術(shù)概述
RIP是研究體內(nèi)蛋白與RNA互作的重要技術(shù)。該技術(shù)先用甲醛等***交聯(lián)細(xì)胞內(nèi)的“蛋白-RNA”互作復(fù)合物，裂解細(xì)胞后，用靶蛋白特異的抗l體(或標(biāo)簽抗l體)做免l疫沉淀，獲得“靶蛋白-RNA”互作復(fù)合物，去交聯(lián)分離其中的RNA;針對(duì)預(yù)測(cè)的靶蛋白結(jié)合RNA的序列設(shè)計(jì)引物，
做qPCR實(shí)驗(yàn)，實(shí)時(shí)定量pcr，驗(yàn)證預(yù)測(cè)的RNA是否與靶蛋白有結(jié)合，或者將分離出來的RNA做高通量測(cè)序，篩選到可能與靶蛋白結(jié)合的RNA。
技術(shù)流程
細(xì)胞交聯(lián)-→細(xì)胞裂解-→免l疫共沉淀→去交聯(lián)→RNA分離→建庫→高通量測(cè)序(或qPCR)。
microRNA芯片:
RNA干擾(RNA Interference， RNAi)現(xiàn)象是一種進(jìn)化上保守的抵御或外來病毒qin犯的防御機(jī)制。將含有靶***mRNA同源互補(bǔ)序列的RNA（Double strand RNA， dsRNA）導(dǎo)入細(xì)胞后，能夠特異地識(shí)別該mRNA，引起mRNA的降解，從而導(dǎo)致相應(yīng)的功能缺失。RNAi提供了一種經(jīng)濟(jì)、快捷、gao效的***特異***表達(dá)的技術(shù)手段，該技術(shù)已被廣泛用于研究***功能和chuan染性***及惡xingzhong瘤***zhi療領(lǐng)域。目前常用的RNA干擾手段為miRNA、 shRNA和siRNA等。
MiRNA是一類可以通過RNAi機(jī)制調(diào)節(jié)***表達(dá)的內(nèi)源性小RNA，人工miRNA與shRNA的設(shè)計(jì)原理基本相同，由于miRNA具有內(nèi)源性，因此其更易產(chǎn)生有效的***沉默。
技術(shù)流程：
dsRNA或pre-miRNA被導(dǎo)入細(xì)胞后，能夠被一種特異的核酸內(nèi)切酶（Dicer）識(shí)別并切割成為小片段，這些片段在RNA解旋酶的作用下解鏈。繼之反義鏈在與體內(nèi)一些酶（包括內(nèi)切酶、外切酶、解旋酶等）結(jié)合形成RNA誘導(dǎo)的沉默復(fù)合物（RNA-Induced Silencing Complex，RISC），RISC與mRNA同源區(qū)進(jìn)行特異性結(jié)合，若miRNA與mRNA的結(jié)合位點(diǎn)配對(duì)，則切割mRNA；若miRNA與mRNA的結(jié)合位點(diǎn)不配對(duì)，則***mRNA的翻譯。
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