免yi共沉淀（Co-IP檢測(cè)）是以抗ti和抗原之間的專一性作用為基礎(chǔ)的用于研究蛋白質(zhì)相互作用的方法。當(dāng)細(xì)胞在非變性條件下被裂解時(shí)，完整細(xì)胞內(nèi)存在的許多蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)間的相互作用也被保留下來。用預(yù)先固化在beads上的蛋白質(zhì)A的抗ti免yi沉淀A蛋白，實(shí)時(shí)熒光定量pcr，那么與A蛋白在體內(nèi)結(jié)合的蛋白質(zhì)B也能一起沉淀下來，熒光定量pcr，再通過蛋白變性分離，pcr檢測(cè)，對(duì)B蛋白進(jìn)行檢測(cè)，進(jìn)而證明兩者間的相互作用。

蛋白質(zhì)雙向電泳實(shí)驗(yàn)流程

1.三氯yi酸-bing酮沉淀法提取蛋白

2.雙向電泳分離待測(cè)樣品

(1)一相等電聚焦前處理按照所用儀器的廠商提供操作手冊(cè)進(jìn)行。蛋白質(zhì)上樣濃度不要超過10mg/mL，否則會(huì)造成蛋白質(zhì)的聚集或沉淀。

(2)等電聚焦完畢后(約需24hr），若不立即進(jìn)行第二相電泳，膠條可夾在兩層塑料薄膜中于-70℃保存數(shù)月。

(3)等電聚焦好的膠條按廠商提供的操作手冊(cè)平衡兩次。平衡完畢后，于電泳儀上用12.5%SDS-PAGE凝膠進(jìn)行電泳分離。儀器設(shè)置為2.5W/膠 45min，15W/膠 5-8hr，20℃。

3.銀染法對(duì)凝膠進(jìn)行染色

(1)固定(2)清洗(3)增敏(4)清洗(5)染色(6)清洗(7)顯影(8)定影(9)水洗

3.凝膠掃描及圖像分析

(1)圖像掃描：凝膠染色后采用Image scanner以300dpi，16-bit模式（65536灰階）進(jìn)行掃描。

(2)圖像分析：掃描完畢后，凝膠繼續(xù)置于1%yi酸中于4℃保存。掃描后的圖像用ImageMaster 2D Platinum software軟件進(jìn)行分析。分析按照軟件廠商提供的說明書進(jìn)行。以***小點(diǎn)面積30，平滑度2為主要參數(shù)***大限度檢測(cè)蛋白質(zhì)點(diǎn)。以目標(biāo)蛋白質(zhì)3個(gè)重復(fù)具有相同趨勢(shì)，目標(biāo)蛋白質(zhì)相鄰位點(diǎn)的相對(duì)一致性，至少2個(gè)重復(fù)有2倍以上差異作為判定差異表達(dá)蛋白質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)。

轉(zhuǎn)錄組測(cè)序

轉(zhuǎn)錄組即某個(gè)物種或特定細(xì)胞在某一功能狀態(tài)下產(chǎn)生的RNA的總和，商洛pcr，是研究細(xì)胞表型和功能的一個(gè)重要手段。與***組不同的是，轉(zhuǎn)錄組的定義中包含了時(shí)間和空間的限定。同一細(xì)胞在不同的生長(zhǎng)時(shí)期及生長(zhǎng)環(huán)境下，其***表達(dá)情況是不相同的。轉(zhuǎn)錄組測(cè)序（RNA-Seq）是指利用第二代高通量測(cè)序技術(shù)進(jìn)行cDNA測(cè)序，快速地獲取某一物種特定qi官或***在某一狀態(tài)下的轉(zhuǎn)錄本。相對(duì)于傳統(tǒng)芯片而言，RNA-Seq無需預(yù)先設(shè)計(jì)探針，即可對(duì)物種的細(xì)胞類型的轉(zhuǎn)錄組進(jìn)行檢測(cè)，能夠提供較的數(shù)字化信號(hào)，更高的檢測(cè)通量以及更廣泛的檢測(cè)范圍，是目前深入研究轉(zhuǎn)錄組復(fù)雜性的良好工具。

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