




lncRNA測序
長鏈非編碼RNAs(long non-coding RNAs,lncRNAs)一般是指長度大于200 nt的RNA,位于細胞核內或胞漿中,不參與蛋白質編碼功能,以RNA形式在多種層面上(表觀遺傳調控、轉錄調控以及轉錄后調控等)調控***的表達水平,在生命活動中具有重要作用。
長鏈非編碼RNA測序(long non-coding RNA sequencing,lncRNA-Seq)是一種使用特定方法降低樣本中rRNA 的豐度,對富集到的 RNA進行文庫構建,再對高通量測序儀產出的數據進行信息分析的研究方法。lncRNA-Seq可一次性獲得樣本中全部的lncRNAs信息,對lncRNAs的類別、功能進行的深入分析,從而快速準確地獲得與特定生物學過程(例如發(fā)育、***等)相關 lncRNA信息。
RNA提取預備工作
RNA酶(Rnase)是導致RNA降解主要的物質。此酶非常穩(wěn)定,在一些的條件下只可暫時失活,但限制因素去除后又迅速***活性。常規(guī)高溫高壓滅菌方法和蛋白***ji不能使所有的Rnase完全失活。
1.它廣泛存在于人的皮膚上,因此制備RNA時必須戴手套
2.RNase的又一污染源是取液器。根據取液器制造商的要求對取液器進行處理。一般情況下采用以DEPC配制的70%乙醇擦洗取液器的內部和外部,***檢測多少錢,可基本達到要求。
3. 塑料制品、玻璃和金屬物品的處理
(1)塑料制品:盡量使用一次性無菌塑料制品。已標明RNase-free的塑料制品,如沒有開封使用過,通常不必再處理。
RNA提取及注意事項
研究***的表達和調控時,實時熒光定量pcr,需要從***或細胞中分離純化RNA。RNA質量的高低經常影響RT-PCR、cDNA庫構建和Northern Blot等分子生物學實驗的成敗。
主要***
Trizol是一種新型總RNA抽提***,***檢測怎么做,內含異***胍等物質,能迅速破碎細胞,***細胞釋放出的核酸酶。
1.
Trizol***含有,具***性和刺激性,注重操作。
2.
RNase污染的主要來源是操作過程中手和空氣中的浮沉,注重配帶手套,樣品盡可能蓋嚴。
3. 細胞裂解必需充分且操作迅速。裂解不完全會降低后得率,因為一部分RNA會殘留在未裂解的細胞中。細胞裂解之后要看不見顆粒狀物質(結締***和骨除外)。在清洗和裂解細胞時在低溫下操作,河北pcr,防止在操作過程中釋放的內源RNase降解了RNA。
4. 酵母和一些***由于細胞壁的特別結構,可以加入Trizol***同時加入無RNase的玻璃珠并劇烈振蕩,使細胞裂解充分。
2-8℃ 避光保存一年。

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