熒光原位雜交技（fish）原理：是利用熒光標記的特異核酸探針與細胞內相應的靶DNA分子或RNA分子雜交，通過在熒光顯微鏡或共聚焦激光掃描儀下觀察熒光信號，來確定與特異探針雜交后被染色的細胞或細胞器的形態(tài)和分布，或者是結合了熒光探針的DNA區(qū)域或RNA分子在染色體或其他細胞器中的***。

       熒光原位雜交技（fish）實驗步驟：

       1、***固定：***取出洗凈后立即放入固定液（DEPC水配制）中固定2-12h。

       2、脫水：***固定完成后經梯度酒精脫水后浸蠟，包埋。

       3、切片：石蠟經切片機切片，攤片機撈片，62°烤箱烤片2h。

       4、石蠟切片脫蠟至水：依次將切片放入二甲1苯Ⅰ 15min-二甲1苯Ⅱ 15min-無水乙醇Ⅰ 5min-無水乙醇Ⅱ 5min，風干，DEPC水浸泡。

       5、消化：根據(jù)***固定時間長短，切片于修復液中煮沸10分鐘，自然冷卻。后***筆畫圈，根據(jù)不同***不同指標特性，滴加蛋白酶K(20ug/ml) 37°消化20min。純水沖洗后PBS洗3次×5min。

原位雜交是在分子生物學領域應用極為廣泛的實驗技術之一，是在研究生物體發(fā)育過程中的一種極為重要的分子遺傳學的研究方法。其英文名為insitu hybridization，水稻RNA原位雜交檢測技術服務，其中in situ為拉丁文，字面的意思理解就是說在其原來的天然的位置處雜交。用已標記的核酸探針與***切片或細胞中的待測核酸中的互補序列雜交， 從而對***細胞中的核酸進行定性、***和相對定量分析。是一種直接、簡便的研究******和表達的方法?；驹?-堿基互補配對原理


分子病理學在蛋白質和核酸等生物大分子水平上，應用分子生物學理論、技術及方法研究***發(fā)生L發(fā)展的過程，從而為傳統(tǒng)的病理學注入了生機。在如今的臨床病理診斷過程中，運用核酸原位雜交、PCR技術、免1疫熒光、免1疫***化學染色等技術，能夠更加深化對***的本質認識，對于腫1瘤的診斷和治1療也有著臨床的指導意義。分子病理學診斷主要應用于以下幾個方面：1、對于腫1瘤易感***的檢測，對于腫1瘤高危人群的篩檢具有實用價值，如檢測GSTπ***以判定個體暴露于致***物是的致******性。2、腫1瘤相關病毒的檢測，如采用原位雜交方法檢測標本中HPV、EBER等病毒。


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