原位雜交是指將特定標(biāo)記的已知順序核酸為探針與細(xì)胞或***切片中核酸進(jìn)行雜交，從而對特定核酸順序進(jìn)行精1確定量***的過程。原位雜交可以在細(xì)胞標(biāo)本或***標(biāo)本上進(jìn)行。

原位雜交的特點(diǎn)是雜交在顯微鏡載玻片上中期染色體標(biāo)本上進(jìn)行。所謂原位即指標(biāo)本上DNA原位變性，在利用放1射性或非放1射性標(biāo)記的已知核酸探針雜交后，通過放1射自顯影或非放1射性檢測體系來檢測染色體上特異DNA或RNA順序，可用放1射性顆粒在某條染色體的區(qū)帶出現(xiàn)的頻率或熒光的強(qiáng)弱來確定探針的位置，從而進(jìn)行準(zhǔn)確的******。

點(diǎn)對點(diǎn)酵母雙雜交驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)流程

1、誘餌蛋白毒性及自激1活檢測；

2、共轉(zhuǎn)化：分別將誘餌/捕獲質(zhì)粒（pGBKT7-Bait/pGADT7-Prey）、陽性對照質(zhì)粒（pGBKT7-p53/pGADT7-T）、陰性對照質(zhì)粒（pGBKT7-Lam/pGADT7-T）分別共轉(zhuǎn)到Y(jié)2H Gold感受態(tài)細(xì)胞中，涂布于DDO平板培養(yǎng)；

3、點(diǎn)板驗(yàn)證：分別從平板上挑單克1隆稀釋10倍、100倍、1000倍，然后點(diǎn)板到TDO/X/A和QDO/X/A固體培養(yǎng)基進(jìn)行驗(yàn)證；

4、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)與報(bào)告整理。

水稻種子是人類重要的食物來源，其發(fā)育涉及一個復(fù)雜的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，其中轉(zhuǎn)錄因子發(fā)揮了關(guān)鍵作用。MADS轉(zhuǎn)錄因子家族成員是植物花器1官發(fā)育的重要調(diào)控因子，已有的研究表明，幾乎所有的水稻MADS***都在種子中表達(dá)，但對MADS家族成員參與水稻種子發(fā)育調(diào)控的研究結(jié)果仍比較少。

在這項(xiàng)研究中，研究組基于前期的表達(dá)譜研究基礎(chǔ)，分析得到了一個在水稻生殖發(fā)育階段優(yōu)先表達(dá)的轉(zhuǎn)錄因子MADS29。細(xì)致分析表明，MADS29在花藥、胚珠和種子中均表達(dá)，且在受精后的母體***表達(dá)量高。MADS29的反義轉(zhuǎn)1***植株呈現(xiàn)種子皺縮、淀粉粒形態(tài)異常、灌漿速率下降等表型。通過解剖學(xué)切片、末端轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記實(shí)驗(yàn)和全***組表達(dá)譜芯片分析等，分子病理技術(shù)服務(wù)，研究人員證明了MADS29通過調(diào)控程序化死1亡(PCD)過程促進(jìn)珠心細(xì)胞和珠心突起處的降解。進(jìn)一步的體外凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)顯示，MADS29能夠通過直接結(jié)合程序化死1亡相關(guān)***的啟動子區(qū)域而調(diào)控其表達(dá)，進(jìn)而影響胚乳發(fā)育。

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