





除了用NTA方法,外泌體電鏡技術服務,該團隊另基于acetylcholinesterase(一種已知的外泌體表達蛋白)評估三種***盒提取外泌體的得率。從NTA結果看,對于血1清和血漿樣本,Exo-spin的提取量高,是其他兩種***盒的1-3倍;相對來說,腦脊髓液的提取率都比較低,外泌體電鏡檢測服務,ExoQuick?提取得到的外泌體濃度低。從基于acetylcholinesterase的分析結果看,其數(shù)值高于NTA方法,且Exo-spin得到的外泌體濃度高于其他兩種***盒。

外泌體(Exosome)指包含了復雜RNA和蛋白質(zhì)的膜性囊泡,其直徑在30-150nm左右。存在于所有生物體液中,包括血液、唾液、尿液、滑液、羊水、細胞培養(yǎng)液等。不論是正常細胞還是腫1瘤細胞,都能夠產(chǎn)生外泌體。 外泌體富含膽固醇和鞘磷脂,具有脂質(zhì)雙分子層結構;此外,外泌體還含有蛋白質(zhì)和核酸。不同細胞來源的外泌體中所含有的生物分子具有細胞種屬特異性,其外泌體特異性與來源細胞相符合。

外泌體分離提取方案。主要方案包括:
1、差速超1速離心法;
適用于細胞上清、灌洗液、尿液等大體積的樣品;
2、基于PEG沉淀原理的***盒法;
適用于血1清、腦脊液等小體積的樣品;
3、超濾提取法;
適用于***培養(yǎng)液或外泌體含量較低的樣品濃縮。亦可搭配超1速離心法,外泌體電鏡檢測,做進一步的提取。
外泌體是細胞外囊泡的一種,外泌體電鏡,其膜來源與粒徑范圍與細胞外囊泡相似,電鏡下,顯示出典型的茶托狀超微結構。實際操作中,通過常規(guī)的單一的方法很難鑒定外泌體。鑒定外泌體需要包含形態(tài)、粒徑、表面分子標記物等多方面的鑒定。具體方法包括:透射電鏡(形態(tài)鑒定)、NTA檢測(粒徑及濃度鑒定)、WB(分子標志物)。NTA檢測作為外泌體鑒定的經(jīng)典方法之一,可同時反映出檢測樣品的濃度及粒徑。質(zhì)量較好,純度較高的外泌體樣品,粒徑分布在30-150nm,原液濃度在10^9左右。為了保證檢測質(zhì)量,對每一個樣品,都會進行3次技術重復。檢測周期為2-3個工作日,可當天到樣當天出結果。

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