后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液為1%多聚甲醛/0.1 M PBS（PH7.2-7.6），含有1/1000 DEPC。室溫固定 10分鐘。蒸餾水洗滌3次。

  原位雜交的預雜交：濕盒的準備——干的雜交盒底部加20%甘油20ml以保持濕度。按每張切片20μι加預雜交液。恒溫箱38-42℃2—4小時。吸取多余液體，不洗。

   雜交——按每張切片20μι雜交液，加在切片上。將原位雜交專1用蓋玻片的保護膜揭開后，蓋在切片上。恒溫箱38-42℃雜交過夜(根據雜交情況可以調節(jié))。

雜交后洗滌：揭掉蓋玻片，37℃左右水溫的2×***洗滌5分鐘×2次；37℃0.5×***洗滌15分鐘×1次; 37℃0.2×***洗滌15分鐘×1次(如果有非特異性染色，重復0.2×***洗滌15分鐘×1-2次)。

        

1，組化

實驗原理：組化（IHC），是應用抗原與特異性結合的原理，通過酶標與底物反應顯色，從而對***細胞內抗原進行***、定性及定量的研究，稱為***化學技術。組化（IHC）具有特異性強、敏感度高、***準確的優(yōu)點。

1， 熒光

實驗原理：熒光（IF），是應用抗原與特異性結合的原理，分子病理技術服務，通過熒光標記對***細胞內抗原進行***、定性及定量的研究。目前皮諾飛生物主要可以對石蠟切片、冰凍切片、細胞爬片、***芯片進行熒光檢測。皮諾飛生物目前已突破傳統(tǒng)的熒光雙標限制，開發(fā)出多色熒光技術（多可達7色）。

應用于分子病理診斷的DNA測序技術有直接測序法和焦磷酸測序法。直接測序技術主要是Sanger等發(fā)明的雙脫氧鏈末端終止法。其原理就是根據核苷酸在某一固定的點開始，隨機在某一個特定的堿基處終止，產生A、T、C、G4組不同長度的一系列核苷酸，然后在尿素變性的PAGE膠上電泳進行檢測，從而獲得DNA序列。直接測序法是***突變檢測的“金標準”，其優(yōu)點是結果準確，重復性好，可檢測整個測序范圍內已知和未知突變點;缺點是步驟多，耗時長，靈敏度低，過程不易控制，在檢測已知突變位點方面將逐漸被熒光定量PCＲ法替代。



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