水稻種子是人類重要的食物來源，其發(fā)育涉及一個復雜的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，其中轉(zhuǎn)錄因子發(fā)揮了關(guān)鍵作用。MADS轉(zhuǎn)錄因子家族成員是植物花器1官發(fā)育的重要調(diào)控因子，已有的研究表明，幾乎所有的水稻MADS***都在種子中表達，但對MADS家族成員參與水稻種子發(fā)育調(diào)控的研究結(jié)果仍比較少。

在這項研究中，研究組基于前期的表達譜研究基礎(chǔ)，分析得到了一個在水稻生殖發(fā)育階段優(yōu)先表達的轉(zhuǎn)錄因子MADS29。細致分析表明，MADS29在花藥、胚珠和種子中均表達，且在受精后的母體***表達量高。MADS29的反義轉(zhuǎn)1***植株呈現(xiàn)種子皺縮、淀粉粒形態(tài)異常、灌漿速率下降等表型。通過解剖學切片、末端轉(zhuǎn)移酶標記實驗和全***組表達譜芯片分析等，研究人員證明了MADS29通過調(diào)控程序化死1亡(PCD)過程促進珠心細胞和珠心突起處的降解。進一步的體外凝膠阻滯實驗顯示，MADS29能夠通過直接結(jié)合程序化死1亡相關(guān)***的啟動子區(qū)域而調(diào)控其表達，進而影響胚乳發(fā)育。

原理

根據(jù)抗原反應(yīng)和化學顯色原理，***切片或細胞標本中的抗原先和一抗結(jié)合，再利用一抗與標記生物素、熒光素等的二抗進行反應(yīng)，前者再用標記辣根過氧化物酶（HRP）或堿性磷酸酶（AKP）等的抗生物素（如鏈霉親和素等）結(jié)合，后通過呈色反應(yīng)或熒光來顯示細胞或***中化學成分，在光學顯微鏡或熒光顯微鏡下可清晰看見細胞內(nèi)發(fā)生的抗原反應(yīng)產(chǎn)物，從而能夠在細胞爬片或***切片上原位確定某些化學成分的分布和含量。

后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液為1%多聚甲醛/0.1 M PBS（PH7.2-7.6），植物染色體壓片技術(shù)服務(wù)，含有1/1000 DEPC。室溫固定 10分鐘。蒸餾水洗滌3次。

  原位雜交的預(yù)雜交：濕盒的準備——干的雜交盒底部加20%甘油20ml以保持濕度。按每張切片20μι加預(yù)雜交液。恒溫箱38-42℃2—4小時。吸取多余液體，不洗。

   雜交——按每張切片20μι雜交液，加在切片上。將原位雜交專1用蓋玻片的保護膜揭開后，蓋在切片上。恒溫箱38-42℃雜交過夜(根據(jù)雜交情況可以調(diào)節(jié))。

雜交后洗滌：揭掉蓋玻片，37℃左右水溫的2×***洗滌5分鐘×2次；37℃0.5×***洗滌15分鐘×1次; 37℃0.2×***洗滌15分鐘×1次(如果有非特異性染色，重復0.2×***洗滌15分鐘×1-2次)。

        

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